使用液氮罐超低溫保存的方法

　　微生物可以低溫保存，低溫保存法有廣泛的微生物保存法。對於(yu) 需要雜亂(luan) 養(yang) 分的微生物種，如果不能堅持其生命力(如植物病原性真菌)的其他儲(chu) 存方法，一般可以低溫保存。

　　這種方法是以較慢的冷凍速度(1℃/分鍾)冷凍存在於(yu) 小管或安瓿中的細胞，直到-150℃，然後將這些小管保存在-150℃。～-在196℃的液氮中。低溫冷凍保護劑不同於(yu) 冷凍幹燥法中使用的冷凍劑。甘油(10%)是ATCC常見的一種、大多數細胞株由二甲亞(ya) (5%)和培養(yang) 液製成的混合物保存。

　　這些化學物質進入細胞可以防止內(nei) 膜的冷凍損傷(shang) 。在低溫容器中保存細胞恢複時，需要小心操作。當管道被加熱時，形成的霜會(hui) 殺死細胞，正確操作可以防止這種麻煩。隻有快速凍結樣品，才能減少活力的喪(sang) 失。方法是將密封的管道迅速放入37℃的水中，直到所有的冰都溶解，然後打開管口，將內(nei) 容物移入培養(yang) 液。低溫保存的微生物需要保存在非常低溫的環境中，所以需要液氮罐。在長期儲(chu) 存過程中，需要經常注意液氮的填充。

　　與(yu) 凍幹法相比，這種儲(chu) 存方法需要更多的資金，包括勞動力和液氮等，以保持儲(chu) 存溫度。星空体育官网app下载

　　1數據病毒低溫保管所需數據包括：熱收縮塑料管、液氮罐、防護手套及麵罩、標記筆、氣體(ti) 噴燈、液氮保溫瓶。

　　2方法

　　(1)剪一段兩(liang) 端各超過冷凍管長度2cm的熱縮塑料管。星空体育官网app下载

　　(2)將含有清除病毒懸液(安排培養(yang) 的上清培養(yang) 液，或安排培養(yang) 液中的細胞溶解物)的上清懸液冷卻幾分鍾，用殺菌移液管將0.2ml冷卻後的上清懸液分配到冷凍管中，並擰緊蓋子。

　　將病毒冷凍管放入熱收縮塑料管中，刺入正確的標簽。

　　(4)用噴燈小心加熱收縮塑料管，並將其包裹在冷凍管中。切記不要在過高的溫度下加熱收縮塑料管。

　　再次小心加熱收縮塑料管的兩(liang) 端，用大鑷子將管端口夾緊至完全密封。

　　(6)在配有液氮的保溫瓶中快速冷凍密封的冷凍管(操作時需戴口罩和手套)。

　　(7)將冷凍冷凍管放入液氮罐內(nei) 的格子中，一起記錄樣品的具體(ti) 存放方向、實驗編號、存放日期等。

　　(8)需求耗時，從(cong) 液氮罐中快速取出所需樣品，放入37℃水浴箱冷凍後，用解剖刀將熱收縮塑料管用冷凍管的矽化墊圈切開。擰開冷凍管的蓋子時，不需要去除熱收縮塑料管。